丁基-瓊脂糖凝膠 H.P.說明書由上海遠(yuǎn)慕生物提供，本司現(xiàn)貨代理銷售ELISA試劑盒，動物血清，標(biāo)準(zhǔn)品對照品，培養(yǎng)基，抗體，瓊脂糖凝膠，染色液，溶液，緩沖液，實驗耗材，生化試劑，化學(xué)試劑及其他試劑，品種齊全，滿足于用戶的實驗需求，價格便宜，有進(jìn)口試劑及國產(chǎn)試劑之分，訂購!
丁基-瓊脂糖凝膠 H.P.參數(shù)說明
中文名：丁基-瓊脂糖凝膠 H.P.
英文名： Butyl -Sepharose H.P.
供應(yīng)商：上海遠(yuǎn)慕
凝膠類型：疏水層析填料
粒徑： 45-165μm
工作PH值：3-12
操作溫度：4-40℃
結(jié)構(gòu)成分：4%交聯(lián)瓊脂糖
包裝：25毫升/瓶，100毫升/瓶，大包裝
配基偶聯(lián)量：40μmol phenyl/ml 凝膠
保存條件：4℃
性狀：白色微球，凝膠狀，保存在20%酒精溶液中
應(yīng)用：疏水層析介質(zhì)，適合含芳香族配體蛋白純化，特別適合單抗的純化等。
丁基-瓊脂糖凝膠 H.P.說明
丁基-瓊脂糖凝膠 H.P.操作步驟
1、裝柱：
a、讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。
b、根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始緩沖液(按凝膠：緩沖液=3：1的比例)配成勻漿。
c、將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜)，務(wù)必使底端無氣泡。
d、用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。
e、打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩(wěn)定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
2、平衡：
讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。
3、上樣：
a、樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。
b、一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。
c、介質(zhì)對樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì)、流動相的離子強(qiáng)度和溫度。鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強(qiáng)，介質(zhì)對組分吸附牢。
4、洗脫：
疏水介質(zhì)可用減小鹽濃度進(jìn)行洗脫;加表面活性劑或有機(jī)溶劑可加強(qiáng)洗脫;zui常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS。
5、再生：
一般用低鹽濃度的緩沖液洗，洗10倍以上柱體積，接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用;若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時洗不掉，可用在位清洗(CIP)除去。
6、在位清洗：
a、對于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用2MNacl去除。
b、對沉淀蛋白、對以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類，可用1MNaOH去除。
c、對強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡;清洗完畢后，用至少3倍緩沖液平衡柱子。
7、注意在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干，氣泡進(jìn)入。
8、去熱源用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時或用0.1M的氫氧化鈉24小時;或用以下方法步驟去除：
a、2倍柱體積的70%乙醇;
b、2倍柱體積50mMTris-HclpH7.5;
c、1倍柱體積4M尿素;
d、3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1MNacl;上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。
9、消毒用0.5~1MNaOH室溫下洗8~10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。
特別注意：上樣之前，樣品必須去除色素，否則色素會被吸附到填料上，影響填料的正常使用。
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