酵母菌菌株的保存與復(fù)蘇實驗

實驗材料 酵母菌

試劑、試劑盒 甘油DMSO

儀器、耗材 凍存管

實驗步驟

1.  配制30%的甘油溶液，在每個15 mm×45 mm，4 ml 的帶蓋的凍存管中加入1 ml 甘油溶液，輕輕擰上螺蓋，高壓滅菌15 min。

2.  為了在凍存管中配制凍存菌液，加入1 ml 對數(shù)后期或靜止早期的培養(yǎng)液，混勻后置干冰中一段時間，然后轉(zhuǎn)存到-70℃冰箱中。

3.  復(fù)蘇菌株時，可以從凍存管中刮下少量細(xì)胞劃在平板上，不要將整個凍存管中的貯存液融化。

4.  細(xì)胞也可以按菌懸液加入80 μl DMOS的方式配制凍存菌株，貯存在-70℃。

酵母菌培養(yǎng)實驗

實驗材料 酵母菌

試劑、試劑盒 葡萄糖

儀器、耗材 搖床錐形瓶離心機(jī)

實驗步驟

1.  在30℃，氧氣充足和以葡萄糖作碳源的條件下，野生型釀酒酵母菌生長得十分良好。當(dāng)酵母菌在試管中培養(yǎng)時，接種酵母菌貯液后應(yīng)輕輕振蕩培養(yǎng)液以便菌體細(xì)胞分散均勻。

2.  在作大體積液體培養(yǎng)時，酵母菌在錐形瓶中生長較好，使用瓶底具隔板的燒瓶增加進(jìn)氧量更有利于酵母菌的生長。

3.  培養(yǎng)酵母菌時很重要的一點就是要保證所有玻璃器皿無任何表面活性劑。還要保持良好的通氣條件，培養(yǎng)液不應(yīng)超過整個燒瓶總體積的1/5，而且置于300 r/min，30℃恒溫?fù)u床中進(jìn)行培養(yǎng)。

4.  對于小量制備DNA和RNA，酵母菌可用玻璃或塑料試管培養(yǎng)，在試管中加入三分之一體積的培養(yǎng)基，并固定在搖床平臺上，于350  r/min 轉(zhuǎn)速振蕩培養(yǎng)。