1、配制溶液
向容器內(nèi)加入所需水量的一部分，按照培養(yǎng)基的配方，稱取各種原料，依次加入使其溶解，最后補(bǔ)足所需水分。對(duì)蛋白胨、肉膏等物質(zhì)，需加熱溶解，加熱過程所蒸發(fā)的水分，應(yīng)在全部原料溶解后加水補(bǔ)足。
配制固體培養(yǎng)基時(shí)，先將上述已配好的液體培養(yǎng)基煮沸，再將稱好的瓊脂加入，繼續(xù)加熱至完/全融化。并不斷攪拌，以免瓊脂糊底燒焦。
2、調(diào)節(jié)pH值
用pH試紙（或pH電位計(jì)、氫離子濃度比色計(jì)）測(cè)試培養(yǎng)基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH進(jìn)行調(diào)節(jié)，直到調(diào)節(jié)到配方要求的pH值為止。
3、過濾
用濾紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養(yǎng)基過濾。用紗布過濾時(shí)，最好折疊成六層，用濾紙過濾時(shí)，可將濾紙折疊成瓦棱形，鋪在漏斗上過濾。
4、分裝
已過濾的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行分裝。如果要制作斜面培養(yǎng)基，須將培養(yǎng)基分裝于試管中。如果要制作平板培養(yǎng)基或液體、半固體培養(yǎng)基，則須將培養(yǎng)基分裝于錐形瓶?jī)?nèi)。
分裝時(shí)，一手捏松彈簧夾，使培養(yǎng)基流出，另一只手握住幾支試管或錐形瓶，依次接取培養(yǎng)基。分裝時(shí)，注意不要使培養(yǎng)基粘附管口或瓶口，以免浸濕棉塞引起雜菌污染。
裝入試管的培養(yǎng)基量，視試管和錐形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培養(yǎng)基時(shí)，每只15×150毫米的試管，約裝3～4毫升（1/4～1/3試管高度），如制作深層培養(yǎng)基，每只20×220毫米的試管約裝12～15毫升。每只錐形瓶裝入的培養(yǎng)基，一般以其容積的一半為宜。
5、加棉塞
分裝完畢后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是過濾空氣，避免污染。棉塞應(yīng)采用普通新鮮、干燥的棉花制作，不要用脫脂棉，以免因脫脂棉吸水使棉塞無(wú)法使用。制作棉塞時(shí)，要根據(jù)棉塞大小將棉花鋪展成適當(dāng)厚度，揪取手掌心大小一塊，鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中，用右手食指插入棉花中部，同時(shí)左手食指與拇指稍稍緊握，就會(huì)形成1個(gè)長(zhǎng)棒形的棉塞。棉塞作成后，應(yīng)迅速塞入管口或瓶口中，棉塞應(yīng)緊貼內(nèi)壁不留縫隙，以防空氣中微生物沿皺折侵入。棉塞不要過緊過松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落為合適。棉塞的2/3應(yīng)在管內(nèi)或瓶?jī)?nèi)，上端露出少許棉花便于拔取。塞好棉塞的試管和錐形瓶應(yīng)蓋上厚紙用繩捆札，準(zhǔn)備滅菌。
6、制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基
培養(yǎng)基滅菌后，如制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基，須趁培養(yǎng)基未凝固時(shí)進(jìn)行。
(1)制作斜面培養(yǎng)基。在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上放1支長(zhǎng)0.5～1米左右的木條，厚度為1厘米左右。將試管頭部枕在木條上，使管內(nèi)培養(yǎng)基自然傾斜，凝固后即成斜面培養(yǎng)基。
(2)制作平板培養(yǎng)基。將剛剛滅過菌的盛有培養(yǎng)基的錐形瓶和培養(yǎng)皿放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，點(diǎn)燃酒精燈，右手托起錐形瓶瓶底，左手拔下棉塞，將瓶口在酒精燈上稍加灼燒，左手打開培養(yǎng)皿蓋，右手迅速將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，每皿約倒入10毫升，以鋪滿皿底為度。鋪放培養(yǎng)基后放置15分鐘左右，待培養(yǎng)基凝固后，再5個(gè)培養(yǎng)皿一疊，倒置過來(lái)，平放在恒溫箱里，24小時(shí)后檢查，如培養(yǎng)基末長(zhǎng)雜菌，即可用來(lái)培養(yǎng)微生物。
有一種簡(jiǎn)捷快速制備斜面培養(yǎng)基的方法，現(xiàn)介紹如下：
制作培養(yǎng)基斜面，傳統(tǒng)的方法是將試管每10支為一組扎成一捆，高壓滅菌后，一支一支地?cái)[成斜面，操作比較煩瑣，占用面積又多，造成諸多不便。
1、將膠合板截成長(zhǎng)18厘米(與試管長(zhǎng)度相等或略短)、寬9厘米(比并排5支試管直徑的總和略窄)的小塊備用。
2、在并排5支試管上面平置截好的膠合板，再在膠合板上面并排放5支試管，然后將試管的上、下端分別用牛皮紙包好，用線扎緊，使膠合板兩側(cè)的試管保持平行，置高壓鍋中滅菌。
3、高壓滅菌后，經(jīng)自然冷卻，待氣壓降至零時(shí)，將高壓鍋的鍋蓋打開點(diǎn)，當(dāng)棉塞水分充分蒸發(fā)后取出，不用拆捆，直接擺成斜面。大量制斜面時(shí)，既快捷又很少占用空間，非常方便，還便于保溫，減緩凝結(jié)速度，充分吸收游離水分。
4、如需將斜面培養(yǎng)基保存一段時(shí)間，可在滅菌前將聚丙烯塑料袋套在試管外并扎緊袋口，滅菌后取出，直接擺成斜面，可防止水分蒸發(fā)。
