影響考馬斯亮藍法測定蛋白質的因素
點擊次數：1106 更新時間：2022-11-18
影響考馬斯亮藍法測定蛋白質的因素有哪些
1）靈敏度高,據估計比Lowry法約高四倍,其最/低蛋白質檢測量可達1mg.這是因為蛋白質與染料結合后產生的顏色變化很大,蛋白質－染料復合物有更高的消光系數,因而光吸收值隨蛋白質濃度的變化比Lowry法要大的多.
?。?）測定快速、簡便,只需加一種試劑.完成一個樣品的測定,只需要5分鐘左右.由于染料與蛋白質結合的過程,大約只要2分鐘即可完成,其顏色可以在1小時內保持穩(wěn)定,且在5分鐘至20分鐘之間,顏色的穩(wěn)定性最好.因而完/全不用像Lowry法那樣費時和嚴格地控制時間.
?。?）干擾物質少.如干擾Lowry法的K 、Na 、Mg2 離子、Tris緩沖液、糖和蔗糖、甘油、巰基乙醇、EDTA等均不干擾此測定法.
此法的缺點是：
?。?）由于各種蛋白質中的精/氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此Bradford法用于不同蛋白質測定時有較大的偏差,在制作 標準曲線時通常選用 g—球蛋白為標準蛋白質,以減少這方面的偏差.
?。?）仍有一些物質干擾此法的測定,主要的干擾物質有：去污劑、 Triton X-100、十二烷基硫酸鈉（SDS）和0.1N的NaOH.（如同0.1N的酸干擾Lowary法一樣）.
?。?）標準曲線也有輕微的非線性,因而不能用Beer定律進行計算,而只能用標準曲線來測定未知蛋白質的濃度.
