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遠慕簡述PCR原理的圖解和優(yōu)缺點
點擊次數(shù):573 更新時間:2023-04-06

  聚合酶鏈式反應(PCR)是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術(shù),它可看作是生物體外的特殊DNA復制,PCR的最大特點是能將微量的DNA大幅增加。因此,無論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸,還是幾十年前兇殺案中兇手所遺留的毛發(fā)、皮膚或血液,只要能分離出一丁點的DNA,就能用PCR加以放大,進行比對。

  PCR是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經(jīng)常是60°C左右)時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結(jié)合,再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應溫度(72°C左右),DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈?;诰酆厦钢圃斓腜CR儀實際就是一個溫控設備,能在變性溫度,復性溫度,延伸溫度之間很好地進行控制。

  PCR法具有特異性強,靈敏度高,快速簡便、純度要求低等優(yōu)點,但也存在一些假陰性、假陽性等問題。

  PCR原理的圖解

  PCR(生物學的聚合酶鏈反應)

  聚合酶鏈式反應是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術(shù),它可看作是生物體外的特殊DNA復制,PCR的最大特點,是能將微量的DNA大幅增加。因此,無論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸,還是幾十年前兇殺案中兇手所遺留的毛發(fā)、皮膚或血液,只要能分離出一丁點的DNA,就能用PCR加以放大,進行比對。這也是“微量證據(jù)"的威力之所在。由1983年美國Mullis首先提出設想,1985年由其發(fā)明了聚合酶鏈反應,即簡易DNA擴增法,意味著PCR技術(shù)的真正誕生。到如今2013年,PCR已發(fā)展到第三代技術(shù)。1973 年,臺籍科學家錢嘉韻,發(fā)現(xiàn)了穩(wěn)定的Taq DNA聚合酶,為PCR技術(shù)發(fā)展也做出了基礎性貢獻。

  PCR(聚合酶鏈式反應)是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經(jīng)常是60°C左右)時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結(jié)合,再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應溫度(72°C左右),DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈?;诰酆厦钢圃斓腜CR儀實際就是一個溫控設備,能在變性溫度,復性溫度,延伸溫度之間很好地進行控制。

  1、基本要素和擴增原理

  基本要素與DNA復制的基本要素是一致的。待拷貝的 DNA 稱為模板,它可以是雙鏈 DNA 也可是單鏈DNA,最后擴增得到的產(chǎn)物是雙鏈狀態(tài)的。引物是 DNA 復制的先鋒,就象結(jié)晶過程中的晶核,引導 DNA 的合成。在 PCR 擴增中一般使用合成的寡核苷酸作引物。DNA 聚合酶是 DNA 復制的動力,在 dNTP 等底物存在時在引物的引導下沿著模板 DNA 合成互補的 DNA 鏈。

  2 、PCR 擴增的步驟

  首先將模板 DNA 置于 92℃ -96℃,進行變性(denaturation)處理,使 dsDNA 在高溫下解鏈成為 ssDNA ,且熱變性不改變其化學性質(zhì);然后退火(annealing) ,將溫度降至 37℃ -72℃,使引物與模板的互補區(qū)相結(jié)合;最后,在 72℃ 條件下, DNA 聚合酶將 dNTP 連續(xù)加到引物的 3'-OH 端,合成 DNA ,這個步驟稱為延伸(extension)。這三個熱反應過程的重復稱為一個循環(huán),經(jīng)過 20-40 個循環(huán)可擴增得到大量位于兩條引物之間序列的 DNA 片段。

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